浙 中西医结合杂志２０１５年第２５卷第３期Ｚｈｅｊ＇ｉａｎｇ ＪＩＴＣＷＭ（Ｖｏ１．２５ Ｎｏ．３ ２０１５） ・经验交流・ 肝硬化患者网织血小板与血小板参数之间的相关性及临床意义 王关键词海 周 蕾。许丹丹 肝硬化；网织血小板；血小板；大血小板比率 网织血小板（ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ，ＲＰ）是骨髓巨 核细胞近期释放人外周血的未成熟细胞＿１１，仅含少 量的粗面内质网和ｍＲＮＡ，不含ＤＮＡ或核的成分， 因此具有合成少量蛋白质的能力，其代表血循环中 最年轻的血小板。与正常血小板相比较，ＲＰ的体积 大，胞浆内含有少量ｍＲＮＡ，具有更强的活性［ ；因此 测定外周血ＲＰ可以比较精确地反映骨髓血小板生 成情况［３１。血小板的平均体积（ＭＰＶ）代表单个血小板 的平均体积，常用来评价骨髓功能；血小板分布宽度 （ＰＤＷ）是反映血小板体积大小是否均匀的参数，Ｐ～ ＬＣＲ反映大血小板比率。有文献ｌ ４ｌ报道，血小板参数 与体外血小板功能有较好的相关性，可间接反映血 小板功能状况。本研究通过对肝硬化患者和慢性肝 炎患者外周血中网织血小板与血小板参数进行测 定，以揭示肝硬化患者血小板变化的原因，并对网织 血小板百分ｔｔ（ＲＰ％）与血常规血小板参数（ＰＬＴ、ＭＰＶ、 ＰＤＷ及Ｐ—ＬＣＲ）的相关关系进行探讨。报道如下。 １资料与方法 １．１一般资料收集浙江省立同德医院２０１３年４ 月健康体检者２０名为对照组，其中男９名，女１１ 名，年龄２０岁～６２岁，血小板计数（１００～３００）ｘｌ０￣Ｌ。 ２０１３年１～４月住院诊断明确的慢性肝炎患者４２例 为慢性肝炎组，其中轻度１８例，中度１５例，重度９ 例；男２３例，女１９例，年龄１８～６５岁。同期住院诊断 明确的肝硬化患者３０例为肝硬化组，男１８例，女１２ 例，年龄３６～７２岁。 １．２诊断标准入选慢性肝炎组和肝硬化组的患者 的诊断均符合２０００年西安全国肝炎会议《病毒性肝 炎防治方案》的诊断标准同；均经血清学检查排除甲、 丙、丁、戊、庚型肝炎病毒感染。 １．３ 仪器与试剂 ＲＰ测定采用美国Ｂｅｃｋｍａｎ 基金项目：浙江省公益技术应用研究项目（Ｎｏ．２０１３Ｃ３７０６６） 作者单位：１浙江省立同德医院检验科（杭州３１００１２）；２杭州市儿童 医院检验科（杭州３１０００３） 通信作者：王海，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｈａｉ．５１８８＠Ｉ６３．ＣＯＩＩ３ Ｃｏｕｌｔｅｒ公司Ｅｐｉｃｓ ＸＬ型流式细胞仪，应用ＳＹＳＴＥＭ １１ Ｓｏｆｔｗａｒｅ获取和分析试验数据，噻唑橙（ＴＯ）和ＣＤ ４１ｂ单抗（ＰＥ标记）购自苏州联科公司。ＰＬＴ计数及 ＭＰＶ及ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ的测定采用Ｓｙｓｍｅｘ ＸＥ一１２００ 型全自动血细胞分析仪及原厂配套试剂（日本Ｓｙｓｍｅｘ 公司）。 １．４ 方 法 １．４．１标本采集符合上述要求的个体，均在治疗 前采集５ｍＬ静脉血，２ｍＬ注人乙二胺四乙酸二钾 （ＥＤＴＡ—Ｋ２）抗凝的真空采血管，充分混匀，立即在血 球计数仪上测定ＰＬＴ、ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ。将同一份 标本５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ，分离出上清，加入ＴＥＳ，离 心（２０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ），然后弃上清，制成富含血小板 的血浆（ＲＰＲ）。取两支ＦＣＭ专用试管，都加入２０１ｘＬ ＰＲＰ，５０￣ｘＬＰＢＳ和１０１ｘＬ ＣＤ４１一ＰＥ单抗，混匀后室温 避光孵育２０ｍｉｎ；一支加入ｌｍＬ ＰＢＳ作为对照管，另 一支加入ｌｍＬ浓度为２０１ｘｇ／Ｌ的Ｔ０试剂作为测定 管，室温孵育３０ｍｉｎ后上流式细胞仪进行测定。剩余 的３ｍＬ注入无抗凝剂的真空采血管，２ｈ内离心 （３０００ｆｆｍｉｎ，１０ｍｉｎ）分离非溶血的血清，行生化项目 检测。 １．４．２标本测定用Ｓｙｓｍｅｘ ＸＥ一１２００血细胞分析 仪及原厂配套试剂（Ｅｌ本Ｓｙｓｍｅｘ公司）测定Ｐ 、 ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ。用美国Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ公司 Ｅｐｉｃｓ ＸＬ型流式细胞仪检测ＲＰ占ＰＬＴ的百分比 （ＲＰ％），ＲＰ绝对值为血小板总数乘以ＲＰ％。参考 Ｍａｔｉｃ等同描述的设门策略，检测对照管和测定管，使 对照管中９９％的血小板位于阴性区来确定阳性阈 值，共检测２０ ０００个血小板，识别标本ＴＯ阳性的 ＲＰ百分比，以ＲＰ％表示。 １．５统计学方法 应用ＳＰＳＳ１６．０软件进行统计分 析，对于符合正态性分布的数据以（ ±ｓ）表示，三组 均数比较Ｆ检验，两组问比较采用ｔ检验；相关性检 验用Ｐｅａｒｓｏｎ直线相关分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统 医结合杂志２０１５年第２５卷第３期Ｚｈｅｉｉａｎｇ ＪＩＴ Ｍ（Ｖｏ！．２５ ． ２Ｑ 计学意义。 ２结果 一０．０３７，Ｐ＞０．０５）；三组ＲＰ％与ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ之 间呈相关关系（Ｐ＜０．０１）。见表３。 记录 ３讨论 肝硬化患者多伴有血小板变化，这种变化既有 各组的临床特征，并检测各组血清谷丙转氨酶 ２．１研究对象的临床特征及实验室检查分析（ＡＩＪＴ）、谷草转氨酶（ＡＳＴ）、白蛋白（Ａｌｂ）、总胆红素 血小板功能的改变，又有血小板数量的变化。多年 （ＴＢ），并计算白球比（Ａ／Ｇ）。对慢性肝炎组、肝硬化组 来，人们一直认为肝硬化血小板减少的原因是由于 一些行脾切除术或ＴＩＰＳ降门静脉 和对照组三组之间进行单因素方差分析，各组间年 脾功能亢进；然而，龄差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），而各组之间血清 压力患者的血小板也会持续低于正常标准，因此，脾 ＡＩＪＴ、ＡＳＴ、Ａｌｂ、ＴＢ水平以及Ａ／Ｇ比值比较，差异有 亢并不能完全解释肝硬化患者血小板减少的机制 。 统计学意义（Ｐ＜０．０１）。见表１。 外周血ＲＰ水平被认为是反映体内血小板生成 ２．２ 各组ＰＬ１’、ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ及ＲＰ％和ＲＰ绝 能力的指标，通过测定外周血中ＲＰ的数量和ＲＰ％ 对值结果分析检测慢性肝炎组、肝硬化组和对照 可以有效的鉴别血小板降低的原因；而ＰＬＴ、ＭＰＶ、 组ＰＬＴ、ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ及ＲＰ％和ＲＰ绝对值，对 ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ是反应血小板功能的参数；ＭＰＶ反映 三组之间进行单因素方差分析，结果显示三组间 血小板体积大小，可用于血小板减少原因的鉴别。若 ＰＬＴ、ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ及ＲＰ％和ＲＰ绝对值差异 血小板破坏增多而引起血小板减少时，ＭＰＶ增大；若 有统计学意义（尸＜０．０５）。与对照组比较，慢性肝炎组 骨髓受损导致血小板减少时，ＭＰＶ减小。另外血栓前 ＰＬＴ降低，ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ升高（拉一２．５１，３．０９， 状态，ＭＰＶ常增大，特别在血小板聚集期，并随其聚 ４．０９，３．６１，Ｐ＜０．０５），肝硬化组ＰＬＴ、ＲＰ％、ＲＰ绝对值 集速率和程度增加而ＭＰＶ增加嗍。ＰＤＷ升高说明血 通常ＭＰＶ增大，ＰＤＷ也增大；Ｐ—ＬＣＲ 降低，Ｐ—ＬＣＲ升高（ ＝一６．１３，一６．３１，一７．５４，２．５６，Ｐ＜ 小板大小不一，０．０５）；与慢性肝炎组比较，肝硬化组ＰＬＴ、ＲＰ％、ＲＰ 升高，提示血小板代谢活跃，黏附力与聚集力相对较 绝对值降低（拄一３．４５，一４．０４，一４．７２，Ｐ＜０．０５）。见表２。 强大。ＲＰ％和ＰＬＴ、ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ同时检测，有 ２．３三组ＲＰ％和ＰＬＴ、ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ相关性分 助于了解慢性肝病患者血小板变化的原因。本研究 析对三组ＲＰ％与ＰＬＴ之间进行相关分析，结果三 发现，与正常对照组比较，慢性肝炎患者ＲＰ％略高于 袁１各组一般资料及临床特征比较（元±ｓ） 组ＲＰ％与Ｐ 之间均无相关关系（ｒ＝－－０．０６２，一０．０４９， 正常对照组，但差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）；ＲＰ绝对 注：与对照组比较， 火０．０５；与慢性肝炎组比较， Ｐ＜０．０５ 表３各组ＲＰ％和ＰＬＴ、ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ相关关系结果 塑 堕堕笙盒 查 ５年 ２５卷第３期Ｚｈｅｊｉａｎｇ ＪＩＴＣＷＭ（Ｖｏ１．２５ Ｎｏ．３ ２ｏ１５） 计数值略低于正常对照组，但差异无统计学意义；而 髓血小板生成情况，值得临床推广应用。 ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ显著升高（Ｐ＜０．０５）；这与岳彩娟 参考文献 等［９１报道一致。说明慢性肝炎患者并无血小板生成障 赵永强，吴卫，等．网织血小板检测在血小板减少症 碍，而导致血小板降低的原因可能性是破坏过多，一 ［１］杨惊，病因鉴别中的意义［ＪＪ．中国实验血液学杂志，２０１０，１８（２）： 般认为与脾脏的吞噬、血小板相关抗体的存在等有 关。也有研究认为，血小板相关免疫球蛋白介导的破 坏也可能是慢性肝炎患者血小板数目减少血小板减 少的原因之一㈣。肝硬化患者ＲＰ绝对计数值和ＲＰ％ ４８２—４８５． ［２］Ｋｕｗａｎａ Ｍ，Ｏｋａｚａｋｉ Ｙ，Ｓａｔ０ｈ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｉｔｉａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｉｎｄ— ｉｎｇｓ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍ－ 均显著低于正常对照（Ｐ＜Ｏ．０５），与Ｍｉｃｈｕｒ等【“】报道 ｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ，２００５，１１８（９）：１０２６— １０３３． 的结果基本一致；而肝硬化患者的ＭＰＶ、ＰＤＷ略高 ［３］曹永献，吴春梅，卢伟．网织血小板检测方法的改良及临 于正常对照组，但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），Ｐ— 床应用［Ｊ］＿青岛大学医学院学报，２００６，４２（３）：２０８—２１１． ＬＣＲ显著升高（Ｐ＜０．０５）；其原因可能主要有二：一是 ［４］孙德华，王前，郑磊，等网织血小板与血常规中血小板相 关参数之间的相关性［Ｊ］．血栓与止血学，２００８，１４（４）： 由门脉高压导致脾功能亢进而致血小板破坏增多， １７２—１７７． 二是由于肝细胞受损而导致由肝细胞分泌的血小板 ５］中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会．病毒 生成素（ＴＰＯ）减少旧，则作用于巨核细胞的ＴＰＯ的量 ［性肝炎防治方案［ＪｌＪ．肝脏，２０００，５（４）：２５７—２６２． 也就越少，生成的网织血小板减少，血小板生成障碍 所致【ｌ３１。有研究【ｌ４］表明，若血小板破坏增多而引起血 １ ６ ｊ Ｍａｔｉｃ Ｂ，Ｃｈａｐｍａｎ Ｓ，Ｚａｉｓｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔ：ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｓｓａｙ 小板减少时，ＭＰＶ增大；若骨髓生成受损导致血小板 ｓｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ Ｊ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，１ ９９８，３４（５）：２２９－２３４． 减少时，ＭＰＶ减小；这与本文所得慢性肝炎患者血小 ［７］戴晓云．肝硬化患者血小板参数检测及其临床意义［Ｊ］．中 板降低与血小板破坏过多有关的结论是一致的。而 外医学研究，２０１１，９（３３）：９－１１． 肝硬化患者的ＭＰＶ与正常对照组无显著性差异，可 ［８］叶云辉，罗清艳．血小板参数和凝血指标联合检测在肝硬 能是由于血小板破坏增多而引起血小板ＭＰＶ增大 化诊疗中的意义［＿Ｉ］．现代诊断与治疗，２０１２，２３（９）：１３５７— 和骨髓生成受损导致血小板ＭＰＶ减小双重作用造 ＭＰＶ、ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ之间均具有良好相关性。我们在 ＲＰ％与ＰＤＷ及Ｐ—ＬＣＲ相关性分析显示，随着ＰＤＷ 及Ｐ—ＬＣＲ增大，ＲＰ％同样出现上升趋势。血小板总 １３６０． ９］岳彩娟，常永超，耿水英．肝脏病患者血小板参数变化的 成的结果。ＲＰ％与ＰＬＴ之间无相关关系，而ＲＰ％与 ［分析［Ｊ］．河南科技大学学报（医学版），２００４，２２（４）：２６７— ２６８． ［１０］Ｍｉｃｈｕｒ Ｈ，Ｍａｓｌａｎｋａ Ｋ，Ｓｚｃｚｅｐｉｎｓｋｉ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ａｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ 数是检测外周血血小板浓度的参数，与ＲＰ％之间无 ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｌ Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｈｅｍ ａｔｏｌ，２００８，３０ 相关关系。ＭＰＶ与ＲＰ％均是反映骨髓血小板生成的 （６）：５１９—５２５． 指标，虽ＭＰＶ与ＲＰ％之间呈正相关关系，但不存在 ［１ １］Ｍｏｎｔｅａｇｕｄｏ Ｍ，Ａｍｅｎｇｕａｌ ＭＪ，Ｍｕｎｏｚ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅｄ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ａｓ ａ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｔｅｓｔ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙ ｔｏｐｅｎｉａ 对应关系；这可能由于ＭＰＶ受小红细胞、红细 一一胞碎片及大血小板的干扰较大，许多情况下不能反 ａｎｔｉ ＣＤ４１双标法，可以有效去除小细细胞、红细胞 碎片及大血小板的干扰，使ＲＰ％能够更好地反映骨 髓巨核细胞的生成状态。 ａｅｔｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｑ ＪＭ，２００８，１０１（７）：５４９－５５５． 肝炎肝硬化患者血小板急剧下降病因分 映血小板实际体积的大小。而检测ＲＰ％时采用ＴＯ／ ［１２］王征，张世斌．析［Ｊ］．胃肠病学和肝病学杂志，２０１２，２０（８）：７２５—７２６． ［１ ３］Ｂｌｏｎｓｋｉ Ｗ，Ｓｉｒｏｐａｉｄｅｓ Ｔ，Ｒｅｄｄｙ ＫＲ．Ｃｏａｇｕｌｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ Ｊ．Ｃｕｒｒ Ｔｒｅａｔ Ｏｐｔｉｏｎｓ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００７，１０（６）： ４６４－４７３． 总之，同时检测肝硬化患者外周血ＰＬＴ、ＭＰＶ、 ［１４］顾冬冬，任元芳．慢性乙型肝炎肝硬化患者血小板参数 ＰＤＷ、Ｐ—ＬＣＲ、ＲＰ％可以更好揭示肝硬化患者血小板 变化及其临床意义［ＪＪ．中外医学研究，２０１３，１１（６）：５９． 变化的原因，并且ＲＰ％较ＭＰＶ可更为精确地反映骨 （收稿：２０１４—０９一Ｏｌ修回：２０１４—１ １－０７）
