中国组织工程研究与ｌ｝缶床康复第ｆ４誊 ４０勋 ２０１０—１０一Ｏ１出版 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｈａｂ￣ｔＮｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｍｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｃｔｏｂｅｒ １，２０１０ Ｖｏ１．１４，Ｎｏ．４０ 人骨髓间充质干细胞移植老年性痴呆大鼠认知能力和海马超微结构的变化木★ 何炜’，薄海 ，牟心红 ，张岭。，李海生 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒａｔｓ Ｈｅ Ｗｅｉ’Ｂｏ Ｈａｌ ，Ｍｕ Ｘｉｎ．ｈｏｎｇ ，Ｚｈａｎｇ Ｌｉｎｇ。Ｌｉ Ｈａ１．ｓｈｅｎｇ ，，Ａｂｓｔｒａｃｔ ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ：Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｔｒｅａｔ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．ｄｕｅ ｔｏ ｕｎｃｌｅａｒ ｏｎｓｅｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｉｎ ｃｌｉｎｉｃ．ｄｒｕｇ Ａ币Ｉｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａ１． Ｂａｓｉｃ Ｄｅｐａ ｅｎｔ Ｄｅｐａｒｔｍｅａｔ ｏｆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ａｍｅｄ Ｐｏｌｉｃｅ Ｆｏｒｃｅ． Ｔｉａｎ｛．ｎ ３∞１６２ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｓ ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｕｓｅｄ，ｂｕｔ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｆｆｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）ｒｍａｉｅｎｓ ｉｎ ｂａｓｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｔａｇｅ．Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｒｅｐｏｒｔ ｃｏｎｃｅｒｎｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｎ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． ＯＢＪＥＣＴｌＶＥ：ＴＯ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓＤＩａｎｔａｔｉＯｎ ｏｎ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ｛ｎ Ａｌｚｈｅｌｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒａｔｓ． ＭＥＴＨＯＤＳ：Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ３０ ｓｅｎｉｌｅ ｍａｌｅ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｗｅｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ＡＩｚ．ｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｍｏｄｅｌ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ．ｔｈｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ．Ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｉ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｄ ｅＣｈｉｎａ ａｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｒｅｇｉｏｎ．Ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ．ｒａｔｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ＢＭＳＣｓ ４ ｐＬ ＨｅＷｅｉ★．Ｍａｓｔｅｒ， Ｌｅｃｔｕｒｅｒ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ａｒｍｅｄ （２ｘｌ０。ｃｅｌｌｓ）．Ｉｎ ｔｈｅ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｒａｔｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ａｎ ｅｑｕａｌ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＢＭＳＣｓ．Ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｂｉｌａｔｅｒａｌｌｙ ｉｔｈ ｐｈｙｓｉｗｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｌｉｎｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｔｈｅ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｄ ｂｙ ｅＹ ｔｙｐｅ ｍａｚｅ ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｗｉｔｈ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｃｔｅｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ． ＲＥＳＵＬＴＳ ＡＮＤ ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｅ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｓｃｏｒｅｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｍｏｄｅＩ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）。ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ Ｐｏｌｉｃｅ Ｆｏｒｃｅ．＂１３ａｎｊｉｎ ３００１６２．Ｃｈｉｎａ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０ Ｏ５），ａｎｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０，０１）．Ｏｎ ｗｅｅｋ １ ２，ｃｏｍｐａｒｅｄ ｉｔｈ ｍｏｄｅｌｗ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｓｃｏｒｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｃｆａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉＯｎ ｇｒｏｕｐ ｓｈｉｎｅｈｗｂｘ＠１６３．ｃｏｍ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ ｔｏ： Ｌｉ Ｈａｌ—ｓｈｅｎｇ，Ｄｏｃｔｏｒ， ａｎｄ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｗ．１ｈ ｔｈｅ ｅｌｃｔｒｅｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｎｊｕｒｄ ｉｅｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔ ｔｈｅ ｍａｊｏｒｉｔｙ ｏｆ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｅｒｅ ｉｎｊｕｒｄ ｍｉｅｌｄｌｙ ｉｎ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐＩａｎｔａｔｉ０ｎ ｇｒｏｕｐ．ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｍａｊｏｒｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ａｌｍｏｓｔ ｎｏｒｍａＩ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒａｎｓＤＩａｎｔａｔｉＯｎ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｓｅ ｊｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｍａｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒａｔｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｎａＩ ｉｎｄｕｃｅｄ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐＩａｎｔａｔｉＯｎ ｌｓ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｏ ｕｎｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｄ ＢＭＳＣｓ．ｅ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｎｅｕｒｏｎａＩ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｍａｖ ｂｅ ｏｎｅ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｈａｔ ＢＭＳＣｓ ｉｍｐｒｏｖｅ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｊｎ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒａｔｓ． Ａｓｓｏｃｉａｔｅ ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ， Ｂａｓｉｃ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ． ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ‘ｓ ＡｍｅｄＰｏｌｉｅ Ｆｏｒｃｃｅ． Ｔｉａｎｊｉｎ ３００１６２， Ｃｈｉｎａ Ｈｅ Ｗ．Ｂｏ Ｈ，Ｍｕ ＸＨ。Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｌｉ ＨＳ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｍ ｃｅｌｅｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｎ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｌｉｈａｉｓｈｅｎｇ６５＠ｙａｈｏｏ ００ｍ．ｃｎ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒａｔｓ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｚｕｚｈｉ Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ Ｙａｎｊｉｕ ｙｕ Ｌｉｎｃｈｕａｎｇ Ｋａｎｇｆｕ． ２０１０：１４（４０）：７４５３—７４５７ 【ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒｔｅｒ ｃｎ ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｚｇｌｃｋｆ．ｏｍ】ｃ Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ：ｔｈｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂａｓｉｃ 摘要 背景：因发病机制不明，目前尚无治愈老年性痴呆的有效方法。现临床上主要是采用药物治疗，而骨髓间充质干细胞的替 代治疗尚处于基础研究阶段，其海马移植后对老年性痴呆认知能力的影响未见报道。 目的：探讨人骨髓间充质干细胞移植对老年性痴呆大鼠认知能力和海马超微结构的影响。 方法：老年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只。制备自然衰老痴呆模型，造模后随机分为３组，选取双侧海马为移植区，分化细胞移 植组注射定向神经细胞诱导分化的人骨髓间充质干细胞悬液４ ｐＬ（２ｘ１０ 个细胞），干细胞移植组注射等量常规培养的人骨髓 间充质干细胞，模型组注射等量生理盐水。通过Ｙ迷宫试验测定大鼠的学习、记忆能力，透射电镜观察海马区超微结构。 结果与结论：与移植前大鼠学习、记忆分数比较，移植后１２周模型组均显著下降（尸＜０．０１），干细胞移植组均有所提高（Ｐ＞ ０．０５），分化细胞移植组均显著提高（尸＜０．０１ ｏ移植后１２周与模型组比较，干细胞移植组、分化细胞移植组大鼠学习、记 忆分数均显著提高（Ｐ＜０．０１ ｏ电镜观察模型组大鼠海马区神经细胞可见明显损伤，干细胞移植组损伤减轻，分化细胞移植 组多数神经细胞结构正常。证实骨髓间充质干细胞移植可以提高老年性痴呆大鼠的认知能力，且定向神经诱导分化的骨髓 间充质千细胞移植治疗效果优于未分化的骨髓间充质干细胞，提示骨髓间充质干细胞减少海马组织神经细胞变性坏死可能 是其改善老年性痴呆大鼠认知功能障碍的作用机制之一。 关键词：老年性痴呆：认知能力：海马：细胞移植：骨髓间充质干细胞 ｄｏｉ：１Ｏ．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—８２２５．２０１０．４０．０１０ 何炜，薄海，牟心红。张岭，李海生．人骨髓间充质干细胞移植老年性痴呆大鼠认知能力和海马超微结构的变化【Ｊ】．中国组 织工程研究与临床康复，２０１０，１４（４０）：７４５３—７４５７． 【ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒｔｅｒ．ｏｒｇ ｈｔｔｐ：／／ｃｎ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ】 Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｃｉｔｙ，Ｎｏ ０７ＪＣＹＢＪＣ０８２００ ＲｅｃｅＮｅｄ：２０１０－０６－０１ Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２０１０－０７－２６ 医学院，’附 属医院， 基础部， 预防医学系，天 津市３００１６２ 何炜★，男，１９７７ 年生，河北省保定 市人，汉族，２００７ 年天津医科大学 毕业，硕士，讲师， 主要从事急诊临 床方面的研究 ｓｈｉｎｅｈｗｂｘ＠１６３． Ｃ０ｍ 通讯作者：李海 生，博士，副教授， 医学院基础 部，天津市 ３００１６２ 者多、治疗效果差和费用昂贵，给家庭和社会 ０ 引言 ｌｉｈａｉｓｈｅｎｇ６５＠ ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 中图分类号：Ｒ３９４．２ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７３－８２２５ （２０１Ｏ）４０－０７４５３－０５ 收稿Ｅｌ期：２０１０－０６．０１ 修回Ｅｌ期：２０１０－０７－２６ 带来沉重的经济负担，因而老年性痴呆的防治 是老年医学研究的重大课题。 由于老年性痴呆的发病机制不明确，国内 外尚无特别有效的治疗方法，老年性痴呆患者 认知功能障碍与脑内神经细胞变性坏死有密切 老年性痴呆是一种最为常见的进行性退行 性中枢神经变性病【’。３］，具有高发病率、高患病 率等特点。因老年性痴呆病程较长、中晚期患 ｜ｓＳＮ １６７３—８２２５ ＣＮ ２１—１ ５３９ｆＲ ｃｏＤＥＮ ｚＬＫＨＡＨ （２０１００４２００１５／ＺＳ Ｑ） ７４５３ ＠ 关 ５】。 …矾。 伺炜．等．久骨髓圈充质干镪咆穆棱老年性痴皋大鼠认知ｌ髓力和海马趣徽结构的变化 成单细胞悬液，采用血球计数板计数法在显微镜下 （￣１ｏｏ）进行计数，调整活细胞浓度为５ｘｌ０” 移植备 用。 关系。研究证实，海马与学习记忆（认知功能）密切相 实验利用自然衰老痴呆大鼠模型，将定向神经诱导 前后的人骨髓间充质干细胞植入海马脑区，观察细胞移 植对老年性痴呆大鼠学习记忆能力、海马超微结构的影 老年性痴呆动物模型的制作：３Ｏ只大鼠均建立老年性 痴呆模型，学习记忆测定在三等分“Ｙ”型迷宫中进行， 让大鼠在迷路箱内适应３ ｍｉｎ，顺时针给予灯光刺激（灯 光区为安全区，其余为刺激区），待其逃避至安全区，灯 光继续作用１ ５ ｓ，然后停灯休息１ ｍｉｎ，再给予第２次刺 激，依次重复４０次，记录正确与错误的次数。满分为１００ 响，初步探讨其改善认知功能障碍的作用机制。 １材料和方法 设计：随机对照动物实验。 分，每出错１次￣１：１２。５分。学习４８ ｈ后进行记忆测试，方 法同上。学习、记忆成绩均在５０分以下者为成功自然衰 老痴呆模型大鼠。 时间及地点：于２００９－０２／２０１０－０３在医学院生 理学与病理生理学教研室完成。 材料： 实验分组：３０只大鼠均成功造模，随机分为模型组、 干细胞移植组、分化细胞移植组，每组１０只。 细胞移植：各组大鼠经３％戊巴比妥钠３０ ｍｇ／ｋｇ腹腔 麻醉后，固定于脑立体定位仪上，头部备皮，７５％乙醇 实验动物：老年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠３Ｏ只，鼠龄２４个月， 体质量（４５０＋１２）ｇ，动物饲养室１２ ｈ光一暗循环 （８：００－２０：ｏｏ），温度２０￣２５℃，湿度３０％－６０％，食 物和水自由摄取，适应喂养７ ｄ后开始实验。 消毒手术区皮肤，无菌操作，切开皮肤，钝性分离，参 动物和营养饲料购自军事医学科学院实验 动物中心，实验过程中对动物的处置符合２００６年中国 科学技术部《关于善待实验动物的指导性意见》的规 定【６】。 细胞、试剂及仪器： 细胞、试剂与仪器 来源 照《大鼠脑立体定位图谱》，选取双侧海马为移植区。 分化细胞移植组注射定向神经细胞诱导分化的人骨髓 间充质干细胞悬液４ ｐＬ（２ｘｌ０５个细胞），注射速度为 １ ｐＬ／ｍｉｎ，留针５ ｍｉｎ；干细胞移植组注射等量常规培养 的人骨髓问充质干细胞；模型组注射等量生理盐水，局 部消毒，缝合皮肤。 取材和电镜观察海马超微结构： ｋ骨髓间充质干细胞 军事医学科学院组织 工程中心 ＤＭＥＭ培养纂、 特级眙牛血清、Ｌ一谷 美国ＨＹＣＬＯＮＥ公司 取材：于移植后１２周，对各组大鼠给予戊巴比妥钠 ５０ ｍｇ／ｋｇ过量麻醉后，打开胸腔，将圆头针从大鼠心尖 氨酰胺、青链霉索 纤维结合素、ＢＤＮＦ、ｂＦＧＦ、ＲＡ 多聚甲醛 ＭＧ一２型迷宫 脑立体定位仪 ＣＯ２培养箱 台式离心机 培养瓶 插入，经二尖瓣至主动脉，同时从右心耳剪开放血。先 向心脏内快速灌注生理盐水２００ ｍＬ（４℃预冷），观察到 从右心流出的液体变清亮，然后用４０ ｇ／Ｌ多聚甲醛 ３００ ｍＬ（４℃预冷）先快后慢灌注２０ ｒａｉｎ。以动物肢体展 开变硬为标准，灌注完毕后立即断头，在冰盘上迅速取 出脑组织，剥离出双侧海马组织，置入２．５％戊二醛中 ４℃冷藏。 电镜观察海马超微结构：之后将海马组织块送中国 美国ＳＩＧＭＡ公司 上海化学试剂公司 张家港市生物仪器厂 日本光电公司 美国ＦＯＲＭＡ ＳＣＩＥＮＴＩＦｌＣ 公司 日本ＫＵＢＯＴＡ公司 美国ＣＯＲＮＩＮＧ公司 日本ＮＩＫＯＮ公司 倒置相差显微镜 修块机、超薄切片机 透射电子显微镜 瑞媳ＬＫＢ公司 日本日立公司 医学科学院血液学研究所超微病理研究室，由后者完成 海马电镜标本制作，以及电镜下观察并摄片。 设计、实施、评估者：第一作者参与实验设计和实 施工作，由第二、三、四作者进行实验实施，第五作者 参与实验设计和评估工作，均经过系统培训，未使用盲 法评估。 统计学分析：由第三作者采用ＳＰＳＳ １３．Ｏ统计软件 实验方法： 人骨髓间充质干细胞的培养及向神经细胞定向诱导分化： 将人骨髓问充质干细胞复苏培养，待细胞汇合约达８Ｏ％ 时，用２．５ ｇ，Ｌ胰蛋白酶消化，按５ｘｌ０。个／瓶密度接种于 涂有纤维结合素的７５ ｃｍ 培养瓶中，设立２０瓶，１Ｏ瓶进 行常规培养，另１０瓶于接种２４ ｈ后弃去培养液，用解剖 液洗２次，加入神经细胞诱导分化液（１０ ｐｇ／Ｌ ＢＤＮＦ、 包进行统计处理，计量资料以 ±ｓ表示，组间比较行单 因素方差分析，以Ｐ＜０．０５为差异有显著性意义。 ２结果 ２０ ｐｇ／ＬｂＦＧＦ、１ ｐｍｏｌ／ＬＲＡ），隔日换液，诱导６ ｄ。倒 置显微镜下观察诱导前后细胞形态变化。细胞用胰蛋白 酶一ＥＤ．ＴＡ＿消化，并用含胎牛血清的培养液终止消化，制 ７４５４ ２．１ 实验动物数量分析 各组大鼠均进入结果分析， 户０．Ｂｏｘ １２００，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０００４ ｃ，ｑ．ｚｇｌｃｋｆ，ｃｏｍ 伺辞．等 凡骨髓闻充矮干细魄移植老年性痴皋太鼠认知能走和海马超徽锚构的变诧 ～ｃ一。 中途无脱落。 ２．２ 动物一般情况 模型组大鼠较术前饮食减少，背 毛色暗、光泽差，呆卧少动且行动迟缓；干细胞移植组、 分化细胞移植组大鼠的一般情况均有所好转。 ２．３人骨髓间充质千细胞向神经细胞样细胞的诱导分 化倒置相差显微镜下，骨髓间充质干细胞形态无明显 改变，呈梭形，增殖至细胞汇合时呈旋涡状排列；定向 诱导后骨髓间充质干细胞分化成神经细胞样细胞，具有 较长单极或多极的突起，胞体呈锥形或圆形，折光性较 强，细胞突起相互连接成网状。 ２．４细胞移植后大鼠学习记忆能力的改变迷宫试验 检测结果显示，与移植前比较，移植后１２周模型组大 鼠的学习、记忆分数均显著下降，差异有非常显著性 意义（Ｐ＜０．０１）；干细胞移植组大鼠的学习、记忆分数 均有所提高，差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）；分化细胞 移植组大鼠的学习、记忆分数均显著提高，差异有非 常显著性意义（Ｐ＜０．０１ ｏ移植后１２周与模型组比较， 干细胞移植组、分化细胞移植组大鼠的学习、记忆分 数均显著提高，差异有非常显著性意义（尸＜０．０１），见 表１。 表１ 各组大鼠学习记忆分数的比较 Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ｓｃｏｒｅｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｆｒ０ｍ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ （ｘ＋ｓ，ｎ＝ｌ ０，ｐｏｉｎｔ） ＭｏｄｅＩ ＢＭＳＣ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ４０．２５￣５．０６ ４３．２５￣３．９２ ３５．７５±４．０９ａ ３６．７５￣４．７２。 ３９．７５￣４．４８ ４０．００￣４．５６ ４－４．７５￣６．９２０ ４７２５￣９．９２０ ．３９．００￣４．５９ ４１．２５￣４．４５ ４９．２５￣６．６７ ４９．５０￣６．３２ 。 ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ 。Ｐ＜００１，ＶＳ．ｐｒｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ； Ｐ（０．０１．ＶＳ．ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ；ＢＭＳＣ：ｂｏｎｅ ．ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ２．５细胞移植对老年性痴呆大鼠海马区神经细胞超微 形态结构的影响 模型组：模型组海马区神经细胞数量明显减少，多 数细胞发生明显退变，丧失完整结构，表现为部分胞 膜溶解，核固缩，核膜边界不清或内陷，核质不均匀， 异染色质增多、聚集成块、边集，胞质中细胞器明显 减少，线粒体膜不完整、肿胀并有空泡变性、嵴模糊 或断裂，粗面内质网肿胀减少、核糖体脱落，甚至见 胞浆空化，大多髓鞘崩解，见图１ａ。 干细胞移植组：与模型组比较，干细胞移植组细胞 改变较轻微，可见少量神经细胞扭曲变形，核膜内陷， 少数细胞胞质浓缩，粗面内质网排列紊乱，部分髓鞘 崩解，见图１ｂ。 分化细胞移植组：分化细胞移植组多数神经细胞结 构正常，少数粗面内质网有轻度脱颗粒，见图１Ｃ。 ｌＳＳＮ １６７３—８２２５ ｃＮ ２’一’５３ Ｒ ｃｏＤＥＮ：ｚＬＫＨＡＨ ３讨论 老年性痴呆是一种进行性中枢神经变性病，其临床 症状的特点是记忆和其他认知功能的显著减退，导致患 ７４５５ ～ｃ一。叼 伺炜．等．Ａ骨髓间充鼹干铺魄移植老年性痴果大鼠试知能力和海马趣微结构韵变化 者无法正常思考与判断，必须由他人照料生活。由于老 死。以往研究证实，海马与记忆功能密切相关，海马神 年性痴呆的发病机制复杂不清，目前尚无治愈该病的有 效方法。几十年研究已充分证实，老年性痴呆患者认知 功能障碍主要是由于脑内胆碱能系统功能失调所致【，Ｊ， 其中前脑基底核胆碱能系统与学习记忆功能关系最为 密切，这些核团聚集脑内９０％以上的胆碱能神经细胞， 经细胞坏死后形成苔藓纤维出芽，苔藓纤维沿海马隔颞 轴横向及纵向延伸，并在局部形成结构重组，这些均能 显著影响海马的信息加工功能，从而导致记忆功能障 碍。实验结果显示，模型组大鼠学习记忆成绩均下降， 与术前相比差异有显著性意义（Ｐ＜０．０１），是大鼠自然 衰老海马神经细胞变性坏死所致。Ｍａｈｍｏｏｄ等 ｌＪ通过 由这些细胞向皮质的投射尤其集中于杏仁核及海马区， 它们是对学习记忆以及痴呆性疾病其他功能起皮质作 用的脑区，也总是老年性痴呆早期最严重受损的脑区。 海马又是老年性痴呆患者脑内发生病变最主要的部位， 老年性痴呆患者海马区胆碱乙酰化酶活性缺失。若将能 合成乙酰胆碱的细胞植入海马，理论上讲是可以起到明 静脉注射骨髓问充质干细胞治疗大鼠脑损伤模型，认为 进入脑内骨髓问充质干细胞所分泌的神经营养因子，对 模型动物的神经功能恢复至关重要，而脑内骨髓间充质 干细胞分化为神经细胞样细胞因为数量很少，所起的作 用有限。大量实验研究证实骨髓问充质干细胞能分泌神 显的治疗作用。中枢神经系统变性的组织不能自然恢 复，而成体内存在的内源性神经干细胞虽能启动自发修 经生长因子、脑源性神经营养因子、胰岛素样生长因子 １、转化生长因子Ｄ１等因子【ｚｚＪ，生长因子作为胞外的分 子信号进一步发挥作用来调节骨髓间充质干细胞的分 化，并且能联合分化后的细胞共同发挥作用。实验结果 发现，干细胞移植组大鼠学习记忆成绩均提高，与移植 复反应，但数量极有限，因此体外诱导多能干细胞分化 为目的细胞，进行细胞移植以修复受损的神经组织，一 直是干细胞研究的热点。 目前用于移植的细胞主要有胚胎干细胞、神经干细 胞和间充质干细胞 ，而前两者无法在临床上推广应用， 由于存在难以克服的困难，主要因素是存在伦理道 前相比差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５），说明骨髓间充质 干细胞在海马内的单独作用有限。由于老年性痴呆的认 知功能障碍与海马内ＣｈＡＴ活性降低有关，人们试图通 德问题和取材非常困难。进一步的研究表明骨髓间充质 干细胞体外诱导可分化形成具有胆碱能神经表型的细 胞［９Ｊ，从而解决了从脑组织分离神经干细胞所遇到的临 床操作问题，更能避免免疫排斥反应，使得自体移植治 疗老年性痴呆成为可能。因此，骨髓间充质干细胞作为 老年性痴呆细胞治疗的理想细胞【协 】，具有十分广阔的 临床应用前景。 一过增加海马Ｉ￣ＡＣｈ含量来改善患者的临床症状，故实验 将定向神经诱导的骨髓问充质干细胞植入海马区，以期 达到治疗目的。作者发现分化移植组大鼠学习记忆成绩 均提高，两者与移植前相比，差异均有显著性意义（Ｐ＜ ０．０１），可能是因分化移植组细胞中含能合成与释放ＡＣｈ 的胆碱能神经细胞所致，推测其治疗作用可能是通过其 分泌的多种神经营养因子以及定向分化为丢失的神经 细胞双重机制，从而起到神经保护和功能修复作用。 总之，海马区神经细胞变性程度，与动物学习记忆 能力损害程度呈正相关，未分化的骨髓问充质干细胞植 入海马可使老年性痴呆大鼠的认知能力得到一定程度的 个理想动物模型的选择对科学研究的意义至关 重要，由于老年性痴呆的病因不详、发病机制不明确， 导致老年性痴呆动物模型多是根据疾病的临床表现、病 理变化或神经生化改变来制备的［１３－１５］，一种模型一般只 模拟了该病的某些方面和特征，目前尚无建立起能全面 再现模拟老年性痴呆病理、生化、行为学等全面特征的 恢复，定向神经诱导分化的骨髓间充质干细胞移植治疗 能明显提高老年性痴呆大鼠的认知能力，提示骨髓间充 质干细胞移植对痴呆大鼠的认知功能障碍有一定的治疗 老年性痴呆动物模型。老年性痴呆是一种与年龄密切相 关的疾病，多见于６０岁以上的老年人，衰老因素在其发 病过程中占有重要地位【． ‘ ，衰老所特有的病理生理改 变，是用年轻动物制作的动物模型所不能替代的，自然 衰老痴呆模型是基于不同的个体对衰老的易感性不同， 通过行为筛选的方式将衰老并具有明显认知功能障碍的 作用，通过减少海马组织内神经细胞变性坏死可能是其 改善老年性痴呆大鼠认知功能障碍的作用机制之一。 ４参考文献 【１】 Ｍａｔｓｕｏｋａ Ｊｏｕｒｏｕｋｈｉｎ ＹＧｒａｙ ＡＪ，ｅｌ ａＩ．Ａ ｎｅｕｒｏｎａＩ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ。ＮＡＰＶＳＩＰＱ．ｒｅｄｕｃｅｓ ｔａｕ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ 个体选出，特点是自然衰老，具有类似老年性痴呆全身 多系统衰老的表现，且其神经系统的损害属于自然发生， 适合于治疗方法的筛选和疗效评价ｌ１ⅢＪ。所以实验制作自 然衰老痴呆大鼠模型作为研究老年性痴呆认知功能障碍 的理想模型，可为临床应用骨髓间充质干细胞治疗老年 【２１ 【３】 ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ ＰｈａｒｒｎａｃｏＩ ＥｘｐＴｈｅｒ．２００８；３２５（１１：１４６－１５３ Ｗ０ｌｆｅ ＭＳ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｍｍａ．ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｆｏｒ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２ＯＯ８：５（３）：３９１—３９８． Ｃｈｅｎ Ｘ．Ｗａｌｋｅｒ Ｄ Ｇ．Ｓｃｈｍｉｄｔ ＡＭ．ｅｔ ａ１．ＲＡＧＥ：ａ ＰｏｔｅｎｔｉａＩ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ａｂｅｔａ－ｍｅｄｉａｔｄ ｃｅｌｅｌｕｌａｒ ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ ｉｎ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｃｕｒｒ ＭｏＩ Ｍｅｄ．２Ｏ０７：７（８）：７３５．７４２ 【４】 Ｍｕｔｈｕｒａｊｕ Ｓ，Ｍａｉｔｊ Ｐ Ｓｏｌａｎｋｉ Ｐ＇ｅｔ ａ１．Ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ｄｅｆｉｃｉｔｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｈｙｐｏｂａｒｉｃ 性痴呆提供实验资料，具有一定的理论性和应用性。 透射电镜显示老年性痴呆大鼠的海马神经细胞超 【５】 ｈｙｐｏｘｉａ．Ｅｘｐ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２０１０；２０３（３）：５８３—５９２． Ｒｅｉｔｚ Ｃ．Ｂｒｉｃｋｍａｎ ＡＭ。Ｂｒｏｗｎ ＴＲ．ｅｌ ａ１．Ｌｉｎｋｉｎｇ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａＩ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｏ ｍｅｍｏｒｙ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｉｎ ａｎ ａｇｉｎｇ 微结构发生了明显的损伤Ｉ 训，甚至出现细胞的变性坏 ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏ１．２００９；６６（１１）：１３８５－１３９２． ＰＯ．Ｂｏｘ １２００，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０００４ ｃｒ／ｚｇｌｃｋｆ，ｃｏｒｎ 鞠炼．等 人骨髓间充缀干细匏移植老年性痂呆丈鬣讽知能力和海马趣微结构的变化 Ｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ．Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｓｕｇｇｅｓｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ．２００６－０９—３０． Ｒ￣Ｒｗｗｗ．ＣＲＴＥＲ．Ｏｒｇ Ｐｒｉｌｌｅｒ Ｃ，Ｄｅｗａｃｈｔｅｒ Ｉ。Ｖａｓｓａｌｌｏ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｔａｎｔ ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ １ ａｌｔｅｒｓ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｊ 【２Ｏ】 【２１】 【２２】 ＢｉｏＩ Ｃｈｅｍ．２００７；２８２（２）：１１１９—１１２７ Ｍａｈｍｏｏｄ Ａ．Ｌｕ Ｄ，Ｌｕ Ｍ，ｅｔ ａＩ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ 中华人民共和国科学技术部．关于善待实验动物的指导性意见． ２００６—０９－３０． Ｂａｓｋｉｎ ＤＳ．Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ＪＬ，Ｐｉｒｏｚｚｏｌｏ ＦＪ，ｅｔ ａ１．Ｂｒａｉｎ ｃｈｏｌｉｎｅ ｉｎｉｕｒｖ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａＩ ｃｅｌｌｓ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ．２０Ｏ３：５３（３）：６９７－７０２． Ｈｏｋａｎ Ｍ，Ｋｕｒｏｄａ Ｓ，Ｓｈｉｃｈｉｎｏｈｅ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａＩ ｃｅｌｌｓ ｐｒｏｔｅｃｔ ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ ｄａｍａｇｅｄ ｎｅｕｒｏｎｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｃｅｔｙＩｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ａｎｄ ｍｅｎｔａＩ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏ１．１９９９；５６（９１：１１２１．１１２３． Ｚｈａｎ Ｙ Ｍａ ０Ｈ．Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｎｅｕｒａＩ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｏｆ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒａｔｓ． ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ．２００８；８６（５）：１ ０２ １ ０３５． ＮｅｕｒａＩ Ｒｅｑｅｎ Ｒｅｓ．２０１０；５（１１）：８２５－８３２． Ｊｏｒｉ ＦＰ，Ｍｃｌｏｎｅ ＭＡ。Ｎａｐｏｌｉｔａｎｏ ＭＡ，ｅｔ ａ１．ＲＢ ａｎｄ ＲＢ２／ｐｌ ３０ ｇｅｎｅｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｂｏｔｈ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ａｎｄ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｆＬＩｎｃｔｉｏｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅａｒｌｙ ｓｔｅｐｓ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｎｅｕｒａＩ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａＥｏｗ 来自本文课题的更多信息～ 金资励：天津市应用基础研究计划项目 （０７ＪＣＹＢＪＣ０８２００），课题名称“骨髓间充质干细胞分化及 移植治疗ＡＤ大鼠的应用基础研究” ［１０】 ｓｔｒｏｍａＩ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ．ＣｅｌＩ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２００５；１２ｆ１）：６５＿７７． Ｓｌａｖｉｎ Ｓ．Ｋｕｒｋａｌｌｉ ＢＱ Ｋａｒｕｓｓｉｓ Ｄ．Ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｓｅ ｏｆ ａｄｕｌｔ ｓｔｍ ｅｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｃｌｉｎ Ｎｅｕｒｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ． ２００８；１１０（９）：９４３—９４６． ｎ ＨＫ．Ｂａｅ ＪＳ．Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ 【１１】 Ｌｅｅ ＪＫ．Ｊｉｓｔｍ ｅｃｅｌｌｓ ｒｅｄｕｃｅ ｂｒａｉｎ ａｍｙｌｏｉｄ—ｂｅｔａ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｇｌｉａ ｉｎ ａｎ ａｃｕｔｅｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ 爱糨课题未涉及任何厂家及相关雇主或其他经济 组织直接或间接的经济或利益的赞助。 ｄｉｓｅａｓｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅ１．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ，２００９；４５０（２）：１３６—１４１． ［１２】 Ｌｅｅ ＪＫ。Ｊｉｎ ＨＫ，Ｅｎｄｏ Ｓ，ｅｔ ａ１．１ｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａＩ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｒｄｕｃｅｓ ｅａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｓｃｕｅｓ ｍｅｍｏｒｙ ｄｅｆｉｃｉｔｓ ｉｎ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｍｉｃｅ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ 壤髫 劫 分别将人骨髓问充质干细胞和定向神经诱 导的骨髓间充质干细胞移植到老年性痴呆模型大鼠的海马 脑区，创立了人骨髓间充质干细胞治疗老年性痴呆认知功能 障碍的新方法，其成果可以推广至其他神经系统疾病干细胞 Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．２０１ ０；２８（２）：３２９－３４３． 【１３】 Ｓｒｉｖａｒｅｅｒａｔ Ｍ．Ｔｒａｎ ＴＴ，ＡＩｚｏｕｂｉ ＫＨ，ｅｔ ａＩ．Ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｓｙｃｈｏｓｏｃｉａｌ ｓｔｒｅｓｓ ｅｘａｃｅｒｂａｔｅｓ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｎｇ—ｔｅｒｎ１ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｅｔａ．ａｍｙｌｏｉｄ ｒａｔ ｍｏｄｅＩ ｏｆ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． ＢｉｏＩ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２００９；６５（１１）：９１８—９２６． 治疗的基础研究，具有潜在和巨大的应用价值。 壤鬈 借 “金 崔 ：实验对大鼠学习记忆能力测 ｆ１４】 Ｒｙｕ ＪＫ ＭｃＬａｒｎｏｎ ＪＧ．Ｂｌｏｃｋ ｏｆ ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ Ｐ２Ｘ（７）ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｓ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｉｎ ａｎ ａｎｉｍａＩ ｍｏｄｅＩ ｏｆ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． 定采用经典方法，即使用三等分…Ｙ型迷宫试验 壤题 掰劈与 层：课题设计上应：追加青年组和正常老 年组大鼠，这样比较细胞移植对大鼠认知能力的影响更有说 服力；另外，需增加时间点，动态观察细胞移植后多个时间 点太鼠学习记忆能力和海马超微结构的改变会更为合理。 提 俗＿屎错 份 骨髓间充质干细胞移植可减少海 Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏ￣．２００８；１９（１７）：１７１５—１７１９． 【１５】 【１６】 ［１ ７】 【１８】 Ｓｈｅｎ Ｌ．Ｊｉ ＨＦ Ｒａｔ’ｓ ｔｒｉｃｋ ｔｏ ｅｓｃａｐｅ ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ ＢｉｏｍｏＩ ｓｆｒｕｃｔ Ｄｙｎ．２００７；２５（３）：２７１—２７４． Ｒｅｉｔｚ Ｃ．Ｂｒｉｃｋｍａｎ ＡＭ，Ｂｒｏｗｎ ＴＲ，ｅｌ ａ１．Ｌｉｎｋｉｎｇ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｔｏ ｍｅｍｏｒｙ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｉｎ ａｎ ａｇｉｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ａｒｃｈ Ｎｅｕｒｏ１．２００９；６６（１１）：１３８５．１３９２． Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｉ ＧＤ．Ｊａｇｕｓｔ ＷＪ．Ａｍｙｌｏｉｄ ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｍｅｎｔｉａ：ｔｅｓｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｍｙｌｏｉｄ ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｂｅｈａｖ ＮｅｕｒｏＩ． ２００９；２１（１）：１１ ７．１２８． Ｌｕｏ ＨＭ。Ｗｅｎｇ Ｗ．Ｚｈｏｎｇｈｕａ Ｌａｏｎｉａｎ Ｄｕｏｑｉｇｕａｎ Ｊｉｂｉｎｇ Ｚａｚｈｉ． ２００７；６（１）：１２．１６． 马组织神经细胞变性坏死，对老年性痴呆大鼠的认知功能障 罗焕敏，翁文．老年性痴呆动物模型的制怍与选择［Ｊ］．中华老年多器 官疾病杂志，２００７．６（１）：１２－１６． 【１９】 ｃａｌａｂｒｅｓｅ Ｂ．Ｓｈａｋｅｄ ＧＭ，Ｔａｂａｒｅａｎ ＩＶ，ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ，ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｒｅ－ａｎｄ ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｊｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｎａｔｕｒａｌｌｙ—ｓｅｃｒｅｔｅｄ ａｍｙｌｏｉｄ—ｂｅｔａ ｐｒｏｔｅｉｎ．ＭｏＩ ＣｅｌＩ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２００７；３５ｆ２１：１８３．１９３． 碍有一定的改善作用，具有较强的理论意义和较好的临床应 用前景。 ｌｓｓＮ ３．８２２５ ＣＮ ２１．’５钓ｆＲ ２０１０年皈权归《中国组织Ｉ程研究 妊球埭复》杂志瓤：瞬自 如何向ＳＣＩ收录的优秀期刊投稿： 《新英格兰医学杂志》副总编哈梅尔 讲述如何在《新英格兰医学杂志》 发表文章（本刊发展部） ２０１０年７月２４－２５日，《新英格兰医学杂志》 杂志总编哈梅尔向中国医学临床及科研工作者 传授在顶级期刊发表文章的注意事项及相关经 验 究数据而得出，无商业性或其他原因所致偏倚。 ３．创新性：研究开创了新领域或有新突破；提 出了新的治疗手段；解决了有争议的重大问题。 ４符合伦理学标准：研究方案获得了机构审 查委员会（ＩＲＢ）或伦理委员会批准，且尽量使 受试者的风险达到最低；在随机对照研究中， 应获取患者的书面知情同意，并且对照组的选 择亦应符合伦理学原则。 玛丽・贝丝・哈梅尔（ＭａｒｙＢｅｔｈ Ｈａｍ ｅＩ） 另外，稿件被退回的原因主要有以下３种。 首先．论文质量不高，科学性存在瑕疵： 《新英格兰医学杂志》稿件评审流程 博士，哈佛大学医学院副教授 担任《美国医 学会杂志》（ＪＡＭＡ）、《内科学年鉴》（Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ）、《普通内科学杂志》（Ｊ Ｇｅｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ） 等审稿人，２００２年起担任《新英格兰医学杂志＊ （Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ）副总编辑 ２００９年，《新英格兰医学杂志》收到论著、 玛丽・贝丝・哈梅尔博士认为一份稿件能 否被刊登，取决于以下４方面情况。 其次，创新性不够，研究证实了既往研究结果 但并未推动相关领域的学术进震：最后，研究 内容集中于某一专科，不具备普遍影响力，更 适宜在专科期刊上发表。 １．重要性：研究结果将改变或影响医疗实践： 由于《新英格兰医学杂志》容量的， 每年只能刊登２００－２５０篇论著，因此，将由该 刊编辑择优决定最终可以刊登的稿件。 文章来源：中国医学论坛报 通讯文章、医学影像等各种形式投稿共计 １４７２５篇，最终发表１６９０篇（１１．５％），其中论著 仅２３１篇（４．８％），稿件评审流程见下图 研究可以加深我们对疾病生物学原理的理解。 ２提供丰富的信息：研究丰富了现有资料： 研究结论提供了明确的方向，且结论是根据研 ｔｓｓＮ １６７３—８２２５ ＣＮ ２１－１５３ Ｒ ｃｏＤＥＮ：ｚＬＫＨＡＨ ７４５７
